中医肿瘤成长和转移实验

不同中医证型对肿瘤生长及转移的影响

 

肿瘤是目前危害人类健康最严重疾病之一,全世界每年大约有600万新诊断的病例,每年死亡人数达450万之众。临床治疗肿瘤一般均根据中医辩证论治的观点,依据病人不同的“证”,施以相应的方剂。阴虚的养阴,气虚的补气,血癖的化癖,但这种方法尚缺乏相应基础实验的理论依据。同时在肿瘤的基础研究中,大多采用养阴、补气、活血化癖等方药研究其对实验动物肿瘤生长及转移的影响。这些实验一般不考虑动物的“证”,而且实验动物难以辩证,因此,此种实验方法不符合中医辩证论治的基本理论,与临床差距较大。实验动物在荷瘤之前,并未赋予不同的“证”,因此相应治疗方剂的疗效评价,亦有待进一步的探讨。因此,肿瘤研究过程中,应先使试验动物均具有某一“证”,再选用相应的方药观察对肿瘤生长或转移的影响,只有这样才符合祖国医学辩证论治的基本理论。另外,各种中医证型对于肿瘤的生长及转移究竟有何影响,目前未见报道。因此,我们对不同中医证型与肿瘤生长及转移的关系进行了研究,报道如一下。

 

1实验材料

 

1.1实验动物:雄性昆明种小鼠,105只,体重20土19,由山东医科大学实验动物中心提供,普通级,动物合格证号:鲁动质字200001002号。

 

1.2试验仪器:分析天平

光学仪器公司;研究显微镜,上海天平仪器厂;石蜡切片机,美国解剖显微镜,美国光学仪器公司;激光多普勒微循环分析仪,天津津科公司生产。

 

1.3试验药物:

甲状腺素,山东省充州生化制药厂,批号9911利血平注射液,上海医科大学红旗制药厂,批号990901;醋酸氢化考的松,中国上海信谊药厂,批号990302;高分子右旋糖昔,天津生化制品厂;胎盘兰,上海化学试剂站分装厂,批号:951205;苦味酸,广东台山化工厂,批号:980502;戊巴比妥钠,上海化学试剂采购供应站分装厂,批号:860122。

 

2试验方法

 

2.1中医证候模型的复制

2.1.1阴虚动物模型的复制方法工:

采用甲状腺素合利血平模型:甲状腺素1.smg,灌胃;利血平0.01mg,臀部肌肉注射,每日一次,连续七天。小白鼠经每天灌胃及注射后,出现体重减轻,身体瘦长,躁动不安,出现阴虚证型的表现。

2.1.2阳虚动物模型的复制方法

采用醋酸氢考模型:每只0.75mg/日,臀部肌肉注射。每日一次,连续七天。小白鼠经注射后,出现体重减轻,逐渐出现萎靡不振的现象,竖毛,毛不光洁,拱背少动,反映迟钝。

2.1.3血虚动物模型的复制方法义:

采用小鼠的球后静脉丛放血法:每日一次,每次0.25ml,连续七天。使血红蛋白含量降至609/l以下。小鼠经连续放血之后,出现精神萎靡行动迟缓,皮毛少光泽,扎堆,眼裂变窄(闭目),眼睛色淡红,口唇苍白,耳尾苍白而凉,嗜睡,饮水增加,体重减轻。通过直接的放血方法,降低动物的各种血细胞,使其表现血虚的有关证候。

2.1.4血癖动物模型的复制方法:

采用高分子右旋糖昔模型:10%的高分子右旋糖昔,0.lml/109,尾静脉注射,每日一次,连续三天。高分子右旋糖昔进入血流后导致血液粘滞性增加、机体容易发生高粘滞血症,经激光多普勒微循环血流分析仪测定出现明显的周围微循环血流量减少,微循环发生明显障碍。

2.1.5脾虚动物模型的复制方法二

采用苦寒泻下法模型:喂饲大黄水浸煎液,每日喂药1次,每次lml(每耐含生药相当19),连续七天。动物出现体重下降,便塘,脱肛,四肢不收、毛枯稿。

 

2.2不同中医证候对肿瘤生长及转移的影响

2.2.1对腹水瘤小鼠存活期的影响:

将试验动物随机分为六组,即空白对照组、阴虚组、阳虚组、血虚组、血疲组、脾虚组,各组小鼠分别编号、称重。然后分别按上述方法进行造模处理,模型稳定后,腹腔接种。选用小鼠肝癌踢,首先腹部皮肤消毒,剪开并拨去腹部皮肤,抽吸腹水,放入无菌容器内,Hanks液洗涤两次,镜检计数肿瘤细胞,调细胞浓度为106/L。取肿瘤细胞悬液,胎盘兰染色,计数存活肿瘤细胞,存活肿瘤细胞数应大于95%。腹水为乳白色之浓稠液体,若为黄色或红色表示存在继发感或腹腔出血则应弃去不用。每只动物,腹部皮肤消毒,腹腔内接种制备好的腹水悬液0.2ml。

2.2.2小鼠实体型肝癌移植肿瘤生长的影响:

H22肿瘤细胞悬液的制备方法同上。造模动物腋下皮肤消毒,将制备的腹水瘤悬液,腋下接种,每只0.2ml。第14天处死动物,先称体重,后解剖皮下瘤块,称重。分别取出肝、心、脾、肺、肾称重,并浸于Bouin氏液内染色,观察自发转移灶的数目。将瘤块浸于10%福尔马林进行固定,常规石蜡切片,进行组织形态学观察DNA定量分析、免疫组化。DNA定量分析:参照国际细胞学会的DNA含量测定与倍体分析推荐的标准。应用武汉同济医科大学研制的千屏影像MPIAS一500多媒体彩色病理图文分析仪进行DNA含量与倍体检测。将待测切片在高倍显微镜下(x4定位后),由电视摄像系统摄取细胞图像,作数字化处理后输入计算机系统,蓝色产物采用560run滤过片,测定每张切片上任意5个视野内每个细胞的积分光密度(IOD值),以同切片内成熟淋巴细胞(50个以上)的IOD值作正常2倍体对照。所有切片均在统一的背底,倍体条件下完成。检测指标:DNA倍体分析,根据各种细胞的DNA含量,将DNA直方图分解为2倍体(ZC),3一4倍体(3一4C),5倍体(SC)以及异倍体(AN),观察DNA含量的峰值、分布区域,分析各组间DNA倍体分布的差异,并计算每组动物DNA异倍体的发生率(AN%)。

 

中药治疗对不同中医证型小鼠肿瘤生长及转移的影响

 

肿瘤是目前危害人类健康最严重疾病之一,尚缺乏有效的防治措施。目前,中医中药在肿瘤的防治中,取得了较好的临床效果,越来越受到人们的重视。临床治疗肿瘤一般均根据中医辩证论治的观点,依据病人不同的“证”,施以相应的方剂。阴虚的养阴,气虚的补气,癖血的化疲,但这种方法尚缺乏相应基础实验的理论依据。同时在肿瘤的基础研究中,大多采用养阴、补气、活血化癖等方药研究其对实验动物肿瘤生长及转移的影响。这些实验一般不考虑动物的“证”,而且实验动物难以辩证,因此,此种实验方法不符合中医辩证论治的基本理论,与临床差距较大。因此,肿瘤研究过程中,应先使试验动物均具有某一“证”,再选用相应的方药观察对肿瘤生长或转移的影响,只有这样才符合祖国医学辩证论治的基本理论。因此,本实验县复制实验动物的模型。

 

1实验材料

1.1实验动物:雄性昆明种小鼠,体重20士lg,有山东医科大学实验动物中心提供,普通级,动物合格证号:鲁动质字200001002号。

 

1.2试验仪器:

分析天平,上海天平仪器厂;石蜡切片机,美国光学仪器公司;研究显微镜,解剖显微镜,美国光学仪器公司:激光多普勒微循环分析仪,天津津科公司生产。

 

1.3试验药物:

甲状腺素,山东省充州生化制药厂,批号9911利血平注射液,上海医科大学红旗制药厂,批号990901;醋酸氢化考的松,中国上海信谊药厂,批号990302;高分子右旋糖昔,天津生化制品厂;胎盘兰,上海化学试剂站分装厂,批号:951205;苦味酸,广东台山化工厂,批号:980502;戊巴比妥钠,上海化学试剂采购供应站分装厂,批号:860122。归附地黄丸,济南宏济堂制药有限公司生产,批号:20000801;六味地黄丸,济南宏济堂制药有限公司生产,批号:20000824:血府逐癖胶囊,吉林省辉南挥发制药股份有限公司生产,批号:991101。

 

一、不同中医证型对肿瘤生长及转移相关性的影响……3

二、中药治疗对不同中医证型小鼠肿瘤生长及转移的影响…20

三、综述…………………………24

 

总结

总之,转移的形成取决于诸多因素。活血化癖药可以从许多方面抑制肿瘤细胞的转移。随着对肿瘤转移机制的深入研究,可进一步揭示活血化疲中药抗肿瘤转移机理。为临床提供疗效可靠、无明显毒副作用的抗转移药物。

 

参考文献

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3.薛雨芳,李振波,陈群.活血化疲方药对恶性肿瘤血行转移的影响.中国中医基础医学杂志,1998,4(6):42一45

4.郑小伟.中医实验动物模型方法学,上海:上海中医药大学出版社,1999年7月,第一版

5.张伯臾.中医内科学,上海:上海科学技术出版社,1985年10月,第一版:187

6.张伯臾中医内科学,上海:上海科学技术出版社,1985年10月,第一版:139

7.方药中;邓铁涛:李克光等.实用中医内科学,上海:上海科学技术出版社,1985年8月,第一版:621

8.刘光元;丁沧清;吴家梁.中医扶正法配合介入化疗治疗肺癌38例.辽宁中医杂志,1996;23(10):453

9.朱长瑞;何保军;王江涛.中医药辨证治疗原发性肝癌38例:附中医药治疗组16例.辽宁中医杂志,1996;23(4):168

10.刘鲁明;钱华;陈震.参麦注射液抗肿瘤作用的初步实验研究.中国实验方剂学杂志,1996,2(4):11一14